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分子互作實驗ChIP染色質(zhì)免疫共沉淀

更新時間:2025-07-10點擊次數(shù):17

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一、技術簡介

ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀)是一種研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的關鍵技術,廣泛應用于轉(zhuǎn)錄因子結合位點鑒定、表觀遺傳修飾分析等領域。


二、技術原理

利用抗原抗體的特異性結合,將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來,能夠真實地反映結合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。

CHIP.png


三、應用場景

1.轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究:鑒定轉(zhuǎn)錄因子(如p53、NF-κB)的DNA結合位點。

2.表觀遺傳學:分析組蛋白修飾(如H3K27me3)在基因沉默中的作用。

3.疾病機制:探索癌癥中異常蛋白(如MYC)的基因組結合模式。

4.可與qpcr、seq等技術聯(lián)用。


四、技術優(yōu)勢

ChIP通過甲醛交聯(lián)捕獲細胞內(nèi)真實狀態(tài)下蛋白質(zhì)與DNA的動態(tài)結合,避免體外實驗的假陰性或假陽性,尤其適合研究轉(zhuǎn)錄因子等短暫結合事件。特異性抗體可精準富集目標蛋白結合的DNA片段,結合qPCR或測序(ChIP-seq)實現(xiàn)低至千細胞級別的檢測(如優(yōu)化試劑盒),靈敏度顯著,且具有廣泛適用性。


五、樣本類型

新鮮細胞(貼壁細胞/懸浮細胞)、凍存細胞、凍存組織、交聯(lián)后細胞樣本。


六、樣本需求

細胞樣本:約1×10^7個(可以是1個10cm皿,或以懸浮細胞形式存儲于離心管中,或1個T75瓶);

凍存組織:約70mg;

交聯(lián)細胞樣本:使用1%甲醛交聯(lián)處理細胞。


七、樣本準備&運輸

活細胞樣本:距離較近的可以將養(yǎng)在皿/T75瓶/離心管內(nèi)的新鮮細胞樣本常溫快遞(最遲次日達)運輸,本市內(nèi)可閃送或親自遞送,距離較遠的,可-80℃凍存細胞干冰運輸;

組織樣本&交聯(lián)后細胞樣本:-80℃凍存干冰運輸。


八、需提供的試劑

檢測用ChIP級抗體。


九、實驗周期

1-2周(不包含測序)


十、其他

后續(xù)檢測選擇RT PCR時,需提供后續(xù)檢測的位點。

甲醛交聯(lián)細胞具體步驟:①在細胞皿中加入終濃度為1%的甲醛,37℃孵育10分鐘;②使用含[1mM PMSF,1μg/ml抑肽酶和1μg/ml pepstatin A]的冰冷DPBS洗滌細胞兩次。③將細胞刮入含有蛋白酶抑制劑的2ml冰冷的DPBS中,并轉(zhuǎn)移到離心管中,凍存寄送。

流程圖.png


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