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原代心肌細胞間的培養(yǎng)都有哪些抗污染措施?

更新時間:2022-11-09點擊次數(shù):2330
  成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁,具有分裂增殖能力。差異貼壁后,原代心肌細胞間中仍有少數(shù)成纖維細胞混雜,如果處理不當(dāng),很容易長成優(yōu)勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂,因此BrdU常規(guī)用于抑制成纖維細胞的生長。但如果用胎牛血清培養(yǎng)細胞,由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子,BrdU很難抑制成纖維細胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象,獲得90%以上的心肌細胞。
  
  觀察原代心肌細胞間形態(tài)時,接種密度低,貼壁心肌細胞數(shù)量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著液體的更換而被丟棄,液體的更換應(yīng)在接種48小時后進行。這不僅會顯著增加貼壁心肌細胞的數(shù)量,還會使BrdU需要更長的時間來抑制成纖維細胞。另外,其和0.1gL1BSA能為心肌細胞提供營養(yǎng)支持,但對心肌細胞的黏附率和凋亡率無明顯影響。
  
  除無菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外,還應(yīng)特別注意以下幾點:獲取心臟時,避免切開消化道。比較安全的方法是切開劍突上肋,不涉及腹腔,減少污染機會。在條件允許的情況下,避免新生大鼠心肌細胞與其他細胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng),防止交叉污染。培養(yǎng)心肌細胞的觀察。
  
  原代心肌細胞間培養(yǎng)液適宜的pH范圍為7.2~7.4。配制和使用培養(yǎng)基時,應(yīng)注意:
  
  1、過濾后pH值會增加0.1~0.3。
  
  2、培養(yǎng)基中加入血清后,pH值會降低,降低的程度與血清的質(zhì)量和含量有關(guān)。
  
  3、及時更換液體。
  
  4、配制好的培養(yǎng)液不宜在4℃下長期保存。這是因為培養(yǎng)液中的CO2會溢出,培養(yǎng)液的pH會升高。每種配制好的培養(yǎng)液應(yīng)盡可能在2周內(nèi)用完,否則應(yīng)部分保存在-20℃下。使用前要補充谷氨酰胺和碳酸氫鈉,再次過濾后才能使用。
  
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